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库存现货:猪近端肾小管细胞,LLC-PK1细胞,形态/培养全国各地均可发货,全国统一价格,运输形式:复苏、冻存以及全血清包被(2ML管子)。
产品名称:LLC-PK1细胞
中文名称:猪近端肾小管细胞
来源:Hampshire猪肾
形态特性:上皮样
生长特性:贴壁生长
培养基:M199 90%, Fetal Bovine Serum 3%
培养条件:37℃ 5% CO2
消化条件:0.25% (w/v) Trypsin-0.53 mM EDTA溶液,消化5-10min
传化比例:1:3-1:8
换液时间:2-3天换液一次
冻存液比例:85%培养基,10%FBS, 5% (v/v) DMSO
冻存密度:1-3 ×10^6/管,液氮保存
活力:91%(ViabilitybyTrypanBlueExclusion)
细胞检测:细胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌
慧颖生物提供400多种细胞系细胞株,以及相应的细胞学实验服务:血管新生、traswell、划痕实验、细胞迁移、克隆形成、细胞凋亡、细胞增殖、细胞周期等。另有:示踪细胞、稳定细胞株构建、细胞代感染、筛药细胞株产品、筛药细胞株定制、pathway研究细胞、STR分型鉴定,细胞染色等技术服务提供。咨询: !
猪近端肾小管细胞,LLC-PK1细胞,形态/培养 细胞传代培养技术:
细胞复苏
1. 将冻存的细胞取出后迅速放入37℃水浴中,并不时摇动,在一分钟内使其*融化
2.将细胞吸出放入有培养基的离心管中中,用滴管轻轻吹打混匀,800转/min,5分钟离心;弃去上清液,加入培养基,混匀再离心一次,弃液,加入4~5ml 培养基,混匀,移入培养瓶中
细胞换液
1.用旧液体轻轻冲洗培养瓶底,然后用滴管吸尽旧液(弃去)
2.加入PBS1~2ml,轻轻摇晃,然后用滴管吸尽旧液(弃去)
3.如果细胞液比较脏,可以重复步骤2
4.加入新培养基,轻轻摇匀,放入培养箱继续培养
细胞传代
1.用旧液体轻轻冲洗培养瓶底,然后用滴管吸尽旧液(弃去)
2.加入PBS1~2ml,轻轻摇晃,然后用滴管吸尽旧液(弃去)
3.加入约1~1.5ml胰酶,室温或培养箱中放置4~5分钟,直到所有贴壁细胞消化下来为止【判断方法:倒置相差显微镜观察,细胞变圆时就可以终止消化】
4.加入约1ml培养基(含有小牛血清)终止消化
5.用滴管吹洗一次,移入离心管, 800转/min,5分钟离心
6.加入培养基,吹打分散细胞,再根据分传细胞瓶数补加一定量的含血清的培养基,制成细胞悬液;分装至2~3个培养瓶中
7.放入培养箱进行培养
细胞计数
1.准备好显微镜、载玻片、盖玻片、血细胞计数板、吸管等仪器设备
2.按照“细胞传代”中讲述的方法制成细胞悬液
3.将细胞悬液取出若干,滴入血细胞计数板,注意不要有气泡进入
4.加样后静置2~3min后观察,数四角大格内的细胞总数。计数时应按照一定的路径,以免遗漏或重复。细胞压线时计上不计下,计左不计右,计数2~3次,取平均值
5. 细胞密度 = 四大格中细胞总数÷4 ×104 = 细胞数/ml悬液
细胞冻存
1. 重复“细胞传代”中的消化细胞的步骤,将细胞消化下来,转移至离心管800转/min,5分钟离心,弃液
2. 沉淀中加入冻存液,轻吹制成悬液
3. 分转到冻存管内,每个1~1.5ml
4. 将冻存管口封严
5.贴上标签,注明冻存时间、细胞种类及代数
6. 按下列顺序降温,并zui终冻存:室温→ 4℃ 20min → -20℃ 30min →-70℃冻存
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