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内皮细胞易于从大血管分离培养成单层细胞,对于研究内皮细胞再生、肿瘤促血管生长因子(TAF)等有很大价值。研究人内皮细胞培养以人脐带静脉灌流消化法zui为简便,其法如下:产后新鲜脐带,无菌剪取10—15厘米长一段,如不能立即培养,可于12小时内保存于4℃。
用三通注射器吸取温PBS 液注入脐静脉中洗去残血,在入口处用线绳扎紧,以防液体返流。用血管钳夹紧脐带一端,从另一端向脐静脉中徐徐注入终浓度为0.1%的粗制胶原酶,充满血管,消化3—10分钟;注入口用线绳扎,以防液体返流。吸出含有内皮细胞的消化液,于离心管中,注入温PBS 轻轻反复冲洗后,一并注入离心管中(此步骤可重复)。离心去上清,加入RPMI1640培养液制成细胞悬液,接种入培养器皿中,置温箱培养。两至三天可见细胞长成单层。
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