NK-92细胞

产品名称：NK-92细胞

中文名称：人恶性非霍奇金淋巴瘤患者的自然杀伤细胞

生长状态：悬浮生长

形态特性：淋巴母细胞

特征特性：NK-92是从一位患有急进性非霍奇金淋巴瘤的50岁白人男性外周血单核细胞衍生来的一株白细胞介素-2依赖型NK细胞株。 这株细胞对很多恶性细胞有细胞毒性；铬释放试验显示它能杀死K562和Daudi细胞。 NK-92细胞(经过照射以防止增殖)可以有效地用于血液中白血病的体外免疫清扫而不危及血细胞的功能。 NK-92细胞有以下特征： CD2, CD7, CD11a, CD28, CD45, CD54表面标记阳性，CD56亮；CD1, CD3, CD4, CD5, CD8, CD10, CD14, CD16, C

NK-92细胞，用10％胎牛+10%马血清 +50μg/mlKANA+MEM培养液，37℃ 下置于5％CO₂培养箱中。待细胞融合至80％，用0．25％胰酶消化传代后接种(细胞密度5 XlO⁴)于培养瓶或孔板，待细胞融合至约70％后用于实验。

细胞株培养方法如下： 

1.贴壁细胞换液：

1)吸光培养瓶中的培养液。

2)用1xD-hank`s洗一次。

3）加入适量的新鲜培养液，接种于新的培养瓶内，放入培养箱内培养。

2.悬浮细胞换液

1)吸光培养瓶中的培养液放入15ml离心管中离心1500rpm 5min。

2)细胞沉淀用1xD-hank`s洗一次。

3)加入适量的新鲜培养液，接种于新的培养瓶内，放入培养箱内培养。

3.细胞传代（贴壁细胞传代采用胰酶消化法，常用消化液为0.25%的胰蛋白液）

1）吸光培养瓶中的培养液。

2）用1xD-hank`s洗一次。

3）加入0.5ml-1ml 0.25%的胰蛋白酶液（以消化液能覆盖整个瓶底为准）。

4）静止2-10分钟（显微镜下动态监测）。

5）吸去胰蛋白酶液，加入培养基。

6）用吸管吸取瓶内培养液，反复吹打瓶壁细胞，形成细胞悬液。

7）吸取1/5-1/10细胞悬液接种于新的培养瓶内。

8）加入适量的新鲜培养液，接种于新的培养瓶内，放入培养箱内培养。

4.细胞冻存：

1)预先配制冻存液：90%胎牛血清+10%DMSO

2)取对数期生长细胞经胰酶消化后加入培养液终止胰酶反应，离心（1500rpm 5min）去上清留沉淀加适量冻存液，用吸管吸打制成细胞悬液（1 XlO⁵-5X10⁶/ml)

3)加入1ml细胞悬液于冻存管中，密封后标记冻存细胞名称和冻存日期。

5.细胞复苏：

1）从液氮中取出冻存管，迅速投入37度-38度水浴中

2）使其融化5min内用培养液稀释至原液体的10倍以上，低速离心1500rpm 5min

3）去上清，加入培养液，细胞转入培养器皿中进行培养