Percoll 细胞分离液

Percoll 细胞分离液

（一）　原理

Percoll是一种包有乙烯吡咯烷酮的硅胶颗粒。渗透压很低（<20mosm／kg H２O）, 粘度也很小，可形成高达1.3g／ml密度，采用预先形成的密度梯度时可在低离心力（200～1000g）于数分至数十分钟内达到满意的细胞分离结果。由 于Percoll扩散常数低，所形成的梯度十分稳定。此外，Percoll不穿透生物膜，对细胞无毒害，因此广泛用于分离细胞、亚细胞成分、细菌及病毒， 还可将受损细胞及其碎片与完好的活细胞分离。

（二）操作方法及注意事项

1.不同浓度（密度）Percoll溶液的制备: 先用9份Percoll与1份8.5％ NaCl或1.5MPBS混合达到生理性渗透压，然后用生理溶液（0.85％ NaCl或0.15M PBS）稀释到所需浓度。

Percoll浓度（％）　　70　　　　60　　　　50　　　　40　　　　30　　　　　20

比重g／ml　　　1.090         1.077         1.067          1.056            1.043               1.031

2. 　不连续密度梯度Percoll层的制备: 先将试管壁用牛血清湿润，除去多余血清，这种预处理可使逐层叠加的Percoll液平稳沿管壁流下，使形成满意的界面。在制备过程中一般用长针头注射器从 高密度向低密度逐层放置，有时相邻两层Percoll比重相差不大时，可将Percoll液放入注射器中，小针头斜面紧贴管壁，任其自然慢慢流下。

3.　装样：样品体积和细胞浓度根据不同细胞而异，一般加样体积不宜过大，细胞浓度也不可过高，否则会影响细胞的分离和回收。

4.　离心：一般采用离心力为400g，时间20～25min。由于多层Percoll之间密度差别不大，因此离心机加速、降速时要慢，要平稳。

5.　取样：当所要分离的细胞绝大部分在两层的界面时，可逐层去除Percoll液后收集界面部位的细胞;有时大部分细胞位于Percoll层中,则需要逐层收集。收获含有Percoll液的细胞经2次洗涤后可供培养或检测用。

Percoll 细胞分离液