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HUVEC人脐静脉内皮细胞

  • 产品型号:
  • 产品时间:2017-05-17
  • 简要描述:慧颖生物拥有完善的细胞库和管理体系,细胞技术20%为博士学历、40%为硕士学历,自公司成立以来,慧颖细胞库携手合作单位,以每月平均近100株的量向高校、医院、研究所等提供优质细胞株细胞系。慧颖生物所出售的HUVEC人脐静脉内皮细胞,细胞株状态良好,光泽度好,*,!
  • 产品简介

【产品名称】:人脐静脉内皮细胞

【代号】:HUVEC

【规格】:株

【生长特性】贴壁

【培养条件】DMEM 10% 优质FBS

【特惠价格】致电

【复苏时间】1-2周

【运输方式】联邦及顺丰

HUVEC人脐静脉内皮细胞是我公司明星产品之一,已被广泛用于细胞信号途径和多种肿瘤发生机制的研究,如以Allcells的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)作为载体,探究细胞粘着分子-1与静脉血栓形成的关系,以及利用我们的产品研究血管生成素-4促使恶性胶质瘤发生的机制等。仅供科研,不适用于临床诊断和治疗。

您一旦购入HUVEC细胞株产品,表明您已接受以下条件:

1. 即使现有的血清学检测结果都是阴性,也会被当做潜在性的污染样本处理。

2. 能够建立和遵循恰当的安全控制程序,保证使用这些产品的安全性。

接收提示:

1. 请仔细检查外包装是否是破损, 冷冻的产品是否融化;如有异常,请立即。

2. 请将产品放入液氮中保存,请不要放在-80℃冰箱中。

一、复苏前准备

1. 包被液的配制:用去离水配制 0.5% 明胶溶液,高压灭菌。

2. 培养瓶的包被:取2-4个T25培养瓶,每个培养瓶加入2-3ml 0.5% 明胶溶液,使包被液均匀的分布在培养瓶底面,置37℃培养箱中,放置(至少放置2小时)。

注意:复苏和传代后的细胞都需要接种在0.5% 明胶包被过的培养瓶中,这样细胞会均匀的分布生长。

二、细胞复苏和接种

1. 37℃水浴预热培养液(HUVEC-004)。

2. 从液氮中取出细胞产品管,快速将其置入37℃水浴中解冻,直到管中只剩下zui后一片结晶(注意:不要让水没过产品管)。 用75%的酒精擦拭产品管外壁。

3. 将产品管中的细胞移至15ml无菌离心管中,慢慢逐滴加入预温的37℃ 基础培养液(HUVEC-004B)培养液4-5ml混匀,边加边摇匀。

4. 用1ml的培养液冲洗产品管,向15ml离心管中加入冲洗的细胞悬液,边滴加边摇匀。

5. 取10μl细胞悬液和10μl台盼蓝混匀后,取10μl计数。 这一步骤非常重要,能确定您收到的产品是否合格(详见如何计数复苏的细胞)

6. 细胞悬液在1500rpm,室温条件下,离心10分钟,去除上清。

7. 加HUVEC完全培养液4-5ml, 轻轻混匀细胞,备用。

8. 接种前将 T25培养瓶中的包被液吸去,按2500-5000个细胞/cm2接种细胞。

9. 每个培养瓶中加完全培养液(HUVEC-004)3-5ml, 后置于37℃、5%CO2 培养箱内培养。

三、细胞换液和培养

注意:复苏或传代后的细胞,请于24小时后,*次更换培养液

1. 复苏后的细胞经37℃、5%CO2 培养箱内培养24小时,此时细胞已完全贴壁,更换培养液后,请

继续在37℃5%CO2培养箱内培养。

2. 之后,每2-3天更换培养液1次,至细胞长至覆盖培养面的 70-80% 可进行传代或冻存。

3. 换液前,请将培养液从4℃中取出,使其恢复到室温。

 

四、消化细胞

1.消化液的配制:用pH7.0-7.2的,分别配制0.5%胰酶液和0.04%EDTA-Na2液,

用前按1:1混合。在细胞传代或冻存前先消化细胞。

将PBS或D-Hank’S液, 消化液,含10% FBS的 基础培养液回复到室温。

2.具体操作如下:

(1)吸去培养液,加入3ml PBS或D-Hank’S液,使PBS或D-Hank’S液均匀的分布在培养瓶细胞表面。之后,吸去PBS或D-Hank’S液。

(2)每个T25培养瓶加入消化液 2ml,使消化液均匀的分布在培养瓶细胞面。

(3)37℃消化2-5分钟,在显微镜下看细胞回缩成圆形后,轻轻震动使绝大部细胞脱落。

(4)向每个培养瓶中加 3-5ml 含10% FBS的 基础培养液(HUVEC-004B)液 中和胰酶的消化作用。

(5)用吸管轻轻吹打培养面使细胞完全脱落后,吸至15ml无菌离心管内。

(6)20℃,1500rpm离心5 分钟,弃上清。

(7)加入一定培养液,调整细胞数量后,抽样加入胎盘蓝计数,得到细胞数和活性后,按细胞数传代或冻存。

五、细胞传代

1. 消化细胞(详见第四步)。

2. 按2500-5000个细胞/cm2接种细胞于T25的培养瓶中(包被过0.5%明胶)。

3. 每个培养瓶中加完全培养液(HUVEC-004)3-5ml, 后置于37℃,5%CO2 培养箱内培养。

六、细胞冻存

1.消化细胞(详见第四步)。

2.调整细胞数2-5×105个/ml,按含细胞的基础培养液(HUVEC-004B)液ml数,配制等量的冷冻保护剂。

3.冷冻保护剂的配制:FBS占80%,DMSO占20%

4.将细胞悬液于冰浴中,逐滴加入冷冻保护剂,边滴加边摇动,加完后用轻轻吹打混匀。

5.在冰浴中,将细胞分装于冻存管中,1.8ml/管。

6.将冻存管置于冻存盒内,放入-80℃冰箱中,24小时后转入液氮中保存。

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