HUVEC人脐静脉内皮细胞

【产品名称】：人脐静脉内皮细胞

【代号】：HUVEC

【规格】：株

【生长特性】贴壁

【培养条件】DMEM 10% 优质FBS

【特惠价格】致电

【复苏时间】1-2周

【运输方式】联邦及顺丰

HUVEC人脐静脉内皮细胞是我公司明星产品之一，已被广泛用于细胞信号途径和多种肿瘤发生机制的研究，如以Allcells的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）作为载体，探究细胞粘着分子-1与静脉血栓形成的关系，以及利用我们的产品研究血管生成素-4促使恶性胶质瘤发生的机制等。仅供科研，不适用于临床诊断和治疗。

您一旦购入HUVEC细胞株产品，表明您已接受以下条件：

1. 即使现有的血清学检测结果都是阴性，也会被当做潜在性的污染样本处理。

2. 能够建立和遵循恰当的安全控制程序，保证使用这些产品的安全性。

接收提示：

1. 请仔细检查外包装是否是破损, 冷冻的产品是否融化；如有异常，请立即。

2. 请将产品放入液氮中保存，请不要放在-80℃冰箱中。

一、复苏前准备

1． 包被液的配制：用去离水配制 0.5% 明胶溶液，高压灭菌。

2． 培养瓶的包被：取2-4个T25培养瓶，每个培养瓶加入2－3ml 0.5% 明胶溶液，使包被液均匀的分布在培养瓶底面，置37℃培养箱中，放置（至少放置2小时）。

注意：复苏和传代后的细胞都需要接种在0.5% 明胶包被过的培养瓶中，这样细胞会均匀的分布生长。

二、细胞复苏和接种

1． 37℃水浴预热培养液（HUVEC-004）。

2． 从液氮中取出细胞产品管，快速将其置入37℃水浴中解冻，直到管中只剩下zui后一片结晶（注意：不要让水没过产品管）。 用75%的酒精擦拭产品管外壁。

3． 将产品管中的细胞移至15ml无菌离心管中，慢慢逐滴加入预温的37℃ 基础培养液（HUVEC-004B）培养液4－5ml混匀，边加边摇匀。

4． 用1ml的培养液冲洗产品管，向15ml离心管中加入冲洗的细胞悬液，边滴加边摇匀。

5． 取10μl细胞悬液和10μl台盼蓝混匀后，取10μl计数。 这一步骤非常重要，能确定您收到的产品是否合格（详见如何计数复苏的细胞）

6． 细胞悬液在1500rpm，室温条件下，离心10分钟，去除上清。

7． 加HUVEC*培养液4－5ml, 轻轻混匀细胞，备用。

8． 接种前将 T25培养瓶中的包被液吸去，按2500－5000个细胞/cm2接种细胞。

9． 每个培养瓶中加*培养液（HUVEC-004）3-5ml, 后置于37℃、5%CO2 培养箱内培养。

三、细胞换液和培养

注意：复苏或传代后的细胞，请于24小时后，*次更换培养液

1． 复苏后的细胞经37℃、5%CO2 培养箱内培养24小时，此时细胞已*贴壁，更换培养液后，请

继续在37℃5％CO2培养箱内培养。

2． 之后，每2-3天更换培养液1次，至细胞长至覆盖培养面的 70-80% 可进行传代或冻存。

3． 换液前，请将培养液从4℃中取出，使其恢复到室温。

四、消化细胞

1．消化液的配制：用pH7.0-7.2的，分别配制0.5%胰酶液和0.04%EDTA-Na2液，

用前按1：1混合。在细胞传代或冻存前先消化细胞。

将PBS或D-Hank’S液, 消化液，含10% FBS的 基础培养液回复到室温。

2．具体操作如下：

（1）吸去培养液，加入3ml PBS或D-Hank’S液，使PBS或D-Hank’S液均匀的分布在培养瓶细胞表面。之后，吸去PBS或D-Hank’S液。

（2）每个T25培养瓶加入消化液 2ml，使消化液均匀的分布在培养瓶细胞面。

（3）37℃消化2-5分钟，在显微镜下看细胞回缩成圆形后，轻轻震动使绝大部细胞脱落。

（4）向每个培养瓶中加 3-5ml 含10% FBS的 基础培养液（HUVEC-004B）液 中和胰酶的消化作用。

（5）用吸管轻轻吹打培养面使细胞*脱落后，吸至15ml无菌离心管内。

（6）20℃，1500rpm离心5 分钟，弃上清。

（7）加入一定培养液，调整细胞数量后，抽样加入胎盘蓝计数，得到细胞数和活性后，按细胞数传代或冻存。

五、细胞传代

1． 消化细胞（详见第四步）。

2． 按2500－5000个细胞/cm2接种细胞于T25的培养瓶中（包被过0.5%明胶）。

3． 每个培养瓶中加*培养液（HUVEC-004）3-5ml, 后置于37℃，5%CO2 培养箱内培养。

六、细胞冻存

1．消化细胞（详见第四步）。

2．调整细胞数2-5×105个/ml，按含细胞的基础培养液（HUVEC-004B）液ml数，配制等量的冷冻保护剂。

3．冷冻保护剂的配制：FBS占80％，DMSO占20％

4．将细胞悬液于冰浴中，逐滴加入冷冻保护剂，边滴加边摇动，加完后用轻轻吹打混匀。

5．在冰浴中，将细胞分装于冻存管中，1.8ml/管。

6．将冻存管置于冻存盒内，放入-80℃冰箱中，24小时后转入液氮中保存。

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